赤芍总苷诱导K562细胞凋亡及对线粒体膜电位和Ca^2＋的影响

摘要

目的:赤芍总苷能诱导鼠HepA和S180细胞凋亡,但赤芍总苷能否抑制K562细胞增殖及其诱导K562细胞凋亡的机制尚不明确。观察赤芍总苷诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡及线粒体膜电位与Ca2+水平的变化,以探讨凋亡机制。方法:实验于2007-03-02/2007-10-20在北京中医药大学细胞生化实验室,国家重点实验完成。①实验材料:赤芍总苷由西安奥晶科技发展有限公司提供,批号:060417,纯度>95%。人红白血病K562细胞株购自上海中科院细胞库。②实验方法:取对数生长期的K562细胞,培养24h后加入50mg/L赤芍总苷进行干预,光镜下观察细胞形态。MTT显色法检测25,50,75,100,150,200,400mg/L赤芍总苷对K562细胞增殖的抑制作用,以仅加入无血清培养基培养的为对照。③实验评估:采用AnnexinV/PI双标记法检测凋亡效应,罗丹明123(Rh123)染色流式检测线粒体膜电位和荧光染料Fluo-3AM流式检测K562细胞内游离Ca2+浓度。结果:①50mg/L赤芍总苷作用K562细胞24h后,出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变。②与对照组相比,不同质量浓度赤芍总苷能明显抑制K562细胞的增殖(P<0.01),并具有量效关系,呈时间和剂量依赖性。③细胞线粒体经Rh123染色呈现明亮绿,不同质量浓度赤芍总苷干预组荧光强度均较对照组明显减弱,膜电位水平较高。④赤芍总苷可引起细胞线粒体膜电位下降。不同质量浓度赤芍总苷组细胞内游离Ca2+浓度均升高,线粒体膜电位下降,与对照组比较差异显著(P<0.01)。结论:赤芍总苷诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过减低细胞内线粒体膜电位及提高游离Ca2+水平,从而导致细胞凋亡。