基于斑马鱼模型的蟾酥甲醇提取物抑制血管生成和抗炎活性研究

摘要

目的对蟾酥甲醇提取物中化学成分进行初步分析,并利用斑马鱼模型评价其抑制血管生成及抗炎活性。方法采用液质联用(LC-MS)技术,用反相C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾-三重四级杆飞行时间质谱正/负离子双重扫描方式,对提取物中的样品进行分析;采用受精后24 h(24 hpf)绿色荧光标记血管的转基因斑马鱼作为实验动物模型,荧光显微镜下观察背部节间血管生成情况,计算节间血管长度,研究PTK787(阳性药,0.2μg/mL)和蟾酥甲醇提取物2、4、6μg/mL浓度对斑马鱼血管生成的影响;采用受精后3 d(3 dpf)健康绿色荧光标记炎症细胞的转基因斑马鱼作为实验动物模型,设置对照组、模型(CuSO_(4),20μmol/L)组、布洛芬(阳性药,20μmol/L)组和蟾酥甲醇提取物(0.4、0.8μg/mL)组,计数神经丘周围炎症细胞个数。结果蟾酥甲醇提取物中共检测出33个色谱峰,并鉴定出其中7个为结合型蟾蜍二烯酸内酯。与对照组比较,蟾酥甲醇提取物4、6μg/mL浓度组斑马鱼血管生成受到抑制,血管长度变短,具有显著性差异(P<0.05、0.01);与对照组比较,CuSO_(4)模型组斑马鱼迁移到神经丘侧线部位的炎症细胞数量显著增多(P<0.01);与模型组比较,蟾酥甲醇提取物0.8μg/mL组炎症细胞迁移减少,具有显著差异(P<0.01)。结论通过LC-MS法从蟾酥甲醇提取物中鉴定出7个结合型蟾蜍二烯酸内酯,蟾酥甲醇提取物具有抑制血管生成和抗炎活性。