青蒿琥酯通过wnt／β-catenin信号通路抑制低分化大肠癌的生长及转移

摘要

目的：研究青蒿琥酯（ART）对低分化大肠癌细胞生长和转移的影响，探讨Wnt／β-catenin信号通路在此抗癌效应中发挥的作用。方法：用免疫荧光和激光共聚焦扫描技术，筛选出β-catenin在细胞核内高度聚集。体外试验中，用MTT法、流式细胞术和ki-67免疫荧光法检测ART对该大肠癌细胞增殖和凋亡的影响；用western blot和免疫荧光法，分析ART对β-catenin表达量及细胞内分布的影响。体内试验中，将荷瘤裸鼠随机分组静脉注射给药，20天后处死裸鼠，称量瘤重，并用免疫组化法检测ART对肿瘤组织中β-catenin表达及分布的影响。用活体生物发光成像技术，实时监测ART对肿瘤增殖和转移活性的影响。结果：来源于中国大肠癌患者肝转移灶的肿瘤细胞CLY，其β-catenin聚集于细胞核内，Wnt／β-catenin通路高度激活。体外试验中，ART对CLY的IC50为20．34±2．20μM；10、20及50μM ART作用于CLY 72h后，凋亡率分别为17．37％，31．22％和40．18％，ki-67的表达也呈现出明显的剂量依赖性降低。ART不影响β-catenin的表达量，但能使其从细胞核内转移到细胞膜上，并下调Wnt／β-catenin通路靶基因c-myc和survivin的表达量，这提示该通路活性受到抑制。体内试验中，ART大剂量问歇给药组和小剂量持续给药组的抑瘤率分别为50．5％和35．4％；肿瘤组织中的β-catenin从细胞核内转移到细胞膜上。ART能有效降低CLY细胞转移活性。结论：ART通过下调低分化大肠癌细胞Wnt／β-catenin通路的活性，抑制其增殖、促进其凋亡，并降低其转移活性。