一种基于终产物丙二醛的体外羟自由基清除荧光检测方法的建立

摘要

目的建立基于终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的体外羟自由基清除荧光检测方法,并与现行的可见光法比较以判断两法的优劣。方法对反应时间、温度、关键反应物脱氧核糖浓度进行考察;比较了两法的灵敏度及测定窗口,并采用两法测定了丹参酮I清除羟自由基的能力。结果选择终浓度2.8 mmol·L^(-1)的脱氧核糖加入到37℃羟自由基生成体系中孵育60 min作为荧光法适宜的反应条件。荧光法的最低检测限(4.49 nmol·L^(-1))要远低于可见光法(39.15 nmol·L^(-1))。在水相和有机(DMSO)溶剂体系下,荧光法的测定窗口均大于可见光法。在终浓度62.5 mg·L^(-1)~1000 mg·L^(-1)范围内,丹参酮I在荧光法中显现出浓度依赖性清除羟自由基的能力。但在可见光法中,丹参酮I清除羟自由基的能力被其自身颜色所干扰。结论与可见光法相比,荧光法具有灵敏度高、受测试物自身颜色及溶剂干扰小的优势,更适用于脂溶性受试物作用的判断。