格尔德霉素通过诱导热休克蛋白反应抑制DA能神经元蛋白水解应激的研究

摘要

目的 探讨格尔德霉素(geldanamycin,GA)通过诱导热休克蛋白(HSP)反应抑制α-突触核蛋白(α-syn)异常表达,加强泛素蛋白酶体降解功能的神经保护作用.方法 鱼藤酮作用于NGF诱导的PC12细胞建立α-syn胞质内过表达细胞模型,MTT法检测GA不同浓度及用药时程条件下的细胞活力,应用Western blot技术及共聚焦免疫荧光双标染色观察GA预处理后细胞内HSP70和t-syn的表达.荧光分光光度计测量各组细胞内蛋白酶体水解酶活性的变化.结果 MTT示GA 20～300 nmol·L-1预处理使细胞活力呈浓度依赖性上升,吸光度分别上升至正常的65%、76%、85%和94%(鱼藤酮组为59%,P＜0.01),而GA与鱼藤酮同时给药或作用于其后20 h细胞活力无明显变化.Western blot结果提示GA预处理使HSP70表达上升至正常的3倍左右.共聚焦显微镜观察显示α-syn过表达现象得以抑制,并证实两者的共定位现象.酶活性测定提示GA预处理使类胰蛋白酶,类糜蛋白酶活性明显增强,荧光指数分别上升至10.4±1.61和96.0±4.77(鱼藤酮组为7.9±0.90和82.4±3.51,P＜0.05),PgH水解酶活性也轻度上升.结论 格尔德霉素可诱发热休克蛋白反应,主要通过HSP70的作用抑制α-syn的异常表达,促进泛素蛋白酶体降解功能,减轻蛋白水解应激反应,发挥神经保护效应.