甲基化转移酶样蛋白3介导的m6A修饰参与高静水压诱导的心房肌细胞电重塑

摘要

目的探讨甲基化转移酶样蛋白3(methyltransferase-like protein 3,METTL3)介导的N-6甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰对高静水压下心房肌细胞L型钙通道的调控作用。方法C57BL/6J小鼠随机分为对照组和高血压组(血管紧张素持续给药4周)。采用Masson染色观察小鼠心房组织纤维化情况,斑点印迹实验检测小鼠心房组织中m6A,Western blot检测METTL3和Cav1.2表达情况。体外培养的小鼠心房细胞株HL-1细胞,予加压构建高静水压模型及干预METTL3,观察细胞中m6A表达含量、METTL3和Cav1.2水平的改变,全细胞膜片钳检测HL-1动作电位时程(action potential duration,APD)及L型钙电流(L-type calcium current,I Ca,L)。结果与对照组相比,高血压组小鼠心房肌细胞形态紊乱,间质纤维化增加,且心房组织中m6A含量及METTL3表达水平也明显增加,离子通道蛋白Cav1.2表达减少。体外培养的HL-1细胞,施予不同静水压(0、20、40 mmHg)干预后,随着静水压的升高,细胞中m6A、METTL3上调,Cav1.2下调。STM2457(特异性METTL3抑制剂)和si-METTL3可逆转上述变化,同时STM2457逆转高静水压所致的HL-1细胞的APD缩短和I Ca,L峰值密度降低,METTL3可直接与CACNA1C(Cav1.2 mRNA)发生结合。结论高静水压下METTL3介导的m6A修饰可直接调控CACNA1C参与心房肌细胞电重塑。