含蜂毒肽的前列腺癌外泌体制备及体外评价

摘要

目的构建含蜂毒肽的前列腺癌外泌体体系,并观察前列腺癌细胞对其摄取能力。方法筛选不同时间饥饿处理的细胞用于提取外泌体;应用超速离心法提取PC-3细胞的外泌体,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)以及Western blot法对所提颗粒进行检测;采用反复冻融法、室温孵育法以及电穿孔法分别制备蜂毒肽外泌体体系,并利用离心法测其包封率大小;应用高效液相色谱法(HPLC)建立蜂毒肽外泌体(EXO-MEL)的含量测定方法;应用荧光倒置显微镜观察PC-3细胞、DU145细胞以及LNCaP细胞对蜂毒肽外泌体的摄取情况。结果饥饿处理24 h为最佳外泌体提取时间点;透射电镜结果显示,外泌体外形呈圆形或椭圆形,具有明显的膜性结构,直径在100 nm左右;NTA分析外泌体的试剂蛋白浓度为0.222 g·L^(-1);Western blot检测外泌体的标志蛋白结果显示Alix、CD63为阳性表达,提示采用饥饿培养PC-3细胞,结合超速离心法提取可获得外泌体。包封率检测结果表明:电穿孔法的包封率为17.51%±2.39%、反复冻融法为11.46%±1.02%、室温孵育法为3.93%±2.44%,电穿孔法包封率最大且有明显差异(P<0.05)。摄取实验表明,PC-3细胞可以有效摄取EXO-MEL,其摄取程度有一定的时间依赖性;DU145以及LNCaP细胞也能摄取EXO-MEL。结论通过饥饿处理加高速离心法可成功获取前列腺癌外泌体,通过电穿孔法制备的蜂毒肽外泌体体系可以被前列腺癌细胞摄取。