双水相萃取-凝胶色谱联用法提取菲牛蛭中的水蛭素

摘要

目的建立水蛭素的双水相萃取-凝胶色谱联用提取法。方法以抗凝血酶活性单位(ATU)为指标,在优化双水相萃取工艺条件基础上,建立以广西菲牛蛭消化液为原料的聚乙二醇/硫酸铵双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素新工艺。结果在所考察的实验范围内,水蛭素对照品双水相萃取最佳工艺条件是:PEG 2000、(NH4)2SO4、NaCl质量分数依次为22%、20%、0.04%,萃取液温度35℃、pH 6.0;萃取物经凝胶色谱除杂以后,得到纯度较高的产品。实验建立的提取工艺处理水蛭素对照品ATU回收率达到81.92%,粗提液分离纯化及小规模工艺放大实验ATU回收率分别为80.34%、80.36%。所获产品比活性达到3 210.27 ATU.mg-1、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果与水蛭素对照品相同。结论双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素效果较好。