环介导等温扩增技术在西洋参鉴定中的应用

摘要

目的 探讨利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术鉴别西洋参的方法。方法 针对西洋参的CYP450基因设计特异性引物,应用RT-LAMP(real time-LAMP)、琼脂糖凝胶电泳和可视化检测3种方法对LAMP检测方法进行优化,并对其灵敏性和特异性进行了评价。结果 LAMP反应体的最佳孵育时间为60 min,最佳反应温度为65℃,最适内外引物比为8∶1。反应体系的灵敏度达到0.5 ng·μL^(-1),特异性较好,能与近缘植物人参相区分开。将人参掺入西洋参模拟市场掺假行为,其检出率达到20%。对市售22份西洋参产品进行检测,其阳性率达到81%。结论 建立了一种快速、简便、特异、灵敏的西洋参LAMP检测方法,为人参和西洋参的快速检测和规范中药市场提供有力工具。