幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因毒性片段克隆表达及其在临床诊断中的应用

摘要

目的以基因工程技术获得的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白为抗原，制备检测血清VacA抗体的ELINA试剂，为进一步制备商品化试剂盒奠定基础，并探讨VacA与相关胃疾病间的关系。方法用PCR从H．pylofi空泡毒紊基因中扩增毒性片段v，克隆及序列分析后在大肠杆菌中表达。用免疫印迹法证实其抗原性。以此为抗原，建立间接酶联免疫吸附试验，与Westem blot法比较，确定其敏感性和特异性。并对H．pylori感染者血清进行检测。结果序列分析克隆表达片段完整，与标准株AF361700比较有1．5％的bp及一个氨基酸发生变异，SDS—PAGE显示表达产物相对分子量为27000，表达量为30％以上。Westem blot显示该蛋白可被H．pylori全菌抗血清所识别。与Westem blot法比较，ELINA的敏感性为93．1％，特异性为92．5％，二者的符合率为92．8％。178份感染者血清中，102份血清VacA抗体为阳性，阳性率为57％，其中胃及十二指肠溃疡患者阳性率为69％，慢性胃炎患者阳性率为54％。结论基因重组H．pylori细胞空泡毒素毒性蛋白具有良好的抗原性，可用于制备检测H．oylori VacA感染的诊断试剂，VacA与胃溃疡和慢性胃炎密切相关。