新型冠状病毒重组抗原制备、纯化及鉴定

摘要

目的制备新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的刺突蛋白(S)和核衣壳蛋白(N)重组抗原。方法利用Blast程序检索目标序列SARS-CoV-2的S蛋白和N蛋白的同源序列,用SWISS-MODEL软件对目标序列进行结构建模,运用DISCO TOPE对S蛋白和N蛋白的B细胞抗原表位进行分析,选取抗原表位较多的序列进行合成;重组抗原分离纯化后制备兔抗新冠病毒蛋白多抗,用Western blot检测抗原SARS-CoV-2的S蛋白以及N蛋白免疫学活性;用ELISA法检测自制抗原与市售抗体的结合能力。结果重组质粒pET-22b-SA、pET-22b-SB、pET-22b-SC、pET-22b-NA、pET-22b-NB测序鉴定结果显示正确;Western blot结果显示,重组抗原与山羊抗兔IgG-HRP有特异性结合反应,表明具有良好的免疫学反应;ELISA法结果显示,重组抗原结合能力明显强于市售抗N蛋白抗原。结论制备的抗原与不同靶IgG和IgM结合能力强,特异性高,具有开发成检测血清SARS-CoV-2特异性IgG和IgM抗体的试剂盒的潜力。