新型唾液酸糖基化探针Ac;ManNAl代谢标记研究

摘要

目的系统评价新型非天然糖代谢探针N-丁炔酰基-全乙酰化甘露糖胺(Ac4Man NAl)在体外细胞水平及体内小鼠组织代谢标记唾液酸情况。方法体外实验,将探针Ac4Man NAl与细胞共培养后,收集蛋白并进行Click反应,通过Westernblot检测探针标记情况。体内实验,通过对Ac4Man NAl组连续7d进行腹腔注射200μl Ac4Man NAl(300 mg/kg,溶于70%DMSO生理盐水),对照组小鼠腹腔注射同体积DMSO生理盐水溶液。第8天,对两组小鼠进行安乐死,取各组织蛋白,通过Click反应后,进行Westernblot分析各组织中的糖标记情况。结果通过探针与细胞共培养,Ac4ManNAl在体外对细胞蛋白标记具有浓度依赖性和时间依赖性,并且此探针对多种类型肿瘤细胞也具有良好的标记效果;小鼠体内代谢标记结果表明,Ac4Man NAl在小鼠各组织标记信号明显,且存在差异。结论本研究结果表明唾液酸探针Ac4Man NAl是一个高效的唾液酸糖基化代谢标记探针,可以在体内外水平实现对细胞和小鼠组织进行标记,为唾液酸代谢标记及其功能研究提供理论依据。