Genetic Correction and Hepatic Differentiation of Hemophilia B-specific Human Induced Pluripotent Stem Cells

摘要

遗传上在人的导致的 pluripotent 干细胞(iPSCs ) 改正一个引起疾病的点变化的目的首先源于出血不止 B patient.Methods，引起疾病的变化被定序人的凝结因素 IX (F IX ) 的编码区域检测基因。Genomic DNA 从 iPSCs 被提取，并且教材被设计放大 F IX 的八 exons。下次，在那些 iPSCs 的点变化遗传上面对 129 核苷酸用 CRISPR/Cas9 技术被改正包含了二个同义的变化的相应修理模板。然后，顶 8 潜在的离开目标地点随后用定序的 Sanger 被分析。最后，改正的克隆被区分进象 hepatocyte 一样房间，并且 F IX 的分泌物被房间行厌烦的 immunocytochemistry 和 ELISA assay.Results 验证在 6 th 编码 exon (c.676 C > T ) F IX 基因。点变化的修正与在大约 22% 点的功效(10/45 ) 和没有离开目标效果在改正的 iPSC 克隆检测了的高度在 situ 经由 CRISPR/Cas9 技术被完成。F IX 分泌物，被 immunocytochemistry 进一步设想并且在 vitro 由 ELISA 确定了，在人的疾病特定的 iPSCs 在白天 21 区别 procedure.Conclusions 变化上到达了大约 6 ng/ml 能被 CRISPR/Cas9 技术精确改正，并且改正了仍然维持的房间肝的区别能力。我们的调查结果可能在临床的应用程序在基于 iPSC 的个性化的治疗上扔一盏灯，特别为出血不止 B。