噻虫啉对表达多房棘球绦虫 nAChR 基因HEK293细胞内钙的影响

摘要

目的构建多房棘球绦虫nAChR真核表达质粒并在HEK293细胞中表达,探讨噻虫啉(thiacloprid,Thia)对异源表达nAChR-HEK293细胞内游离钙离子的影响,为进一步研究nAChR基因的结构和功能奠定基础。方法对多房棘球绦虫nAChR蛋白进行生物信息学分析。扩增nAChR序列全长,构建真核表达质粒pCMV-EGFP-nAChR并转染HEK293细胞。噻虫啉刺激后检测转染细胞内游离钙离子水平及全细胞膜电流。结果nAChR为四次跨膜蛋白,α螺旋和无规则卷曲是该蛋白的主要组成成分。噻虫啉与nAChR活性位点附近PHE 207、PHE 24、ARG 244形成Pi-Pi相互作用,与LEU 60形成盐桥。PCR扩增在接近2000 bp处观察到明显条带,经过测序证实获得nAChR序列与Wormbase Parasite数据库序列一致。重组质粒pCMV-EGFP-nAChR转染HEK293细胞成功表达nAChR蛋白于细胞膜上。噻虫啉促进nAChR-HEK293细胞内游离钙离子水平增加,并诱发nAChR-HEK293细胞内向型膜电流。结论噻虫啉促进异源表达nAChR-HEK293细胞胞内游离钙离子水平增加并诱发内向型膜电流。