猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达及其免疫原性分析

摘要

为了表达猪圆环病毒3型(PCV3)衣壳(Cap)蛋白,分析其免疫原性,本试验构建了不包含Cap蛋白核定位序列的原核表达质粒pET-28a-PCV3-Cap,应用大肠杆菌Escherichia coli表达系统诱导表达了重组Cap蛋白;通过SDS-PAGE、Western Blot及液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术对表达蛋白进行了鉴定;分析预测了蛋白的抗原表位,并通过动物试验分析蛋白的免疫原性.结果 显示,在31°C下经0.5 mmol/L的IPTG诱导4h,蛋白(25.4 kDa)表达量最高,其主要以包涵体形式表达;表达蛋白与PCV3参考毒株Cap蛋白氨基酸序列的一致性为88.4％(152/172aa),并且预测的抗原表位与参考毒株的相符;重组蛋白能够刺激小鼠产生特异性抗体,平均抗体水平≥1∶12800.上述结果表明,表达的蛋白具有良好的免疫原性.该试验为深入解析PCV3-Cap蛋白抗原表位的免疫活性以及相关亚单位疫苗和特异性抗体检测技术的研究提供了科学依据.