犬细小病毒VP2基因乳酸菌表达载体的构建及蛋白检测

摘要

本研究旨在克隆犬细小病毒VP2 (CPV-VP2)基因,构建乳酸菌重组表达载体,以乳酸菌表达CPV-VP2目的蛋白,通过重组目的蛋白检测及分析,为CPV乳酸菌口服疫苗研究提供支撑.以PCR方法扩增CPV-VP2编码目的基因,纯化后连接表达载体pMG36e,构建重组乳酸菌表达载体pMG36e-VP2,电转至乳酸球菌MG1363感受态,经PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析,挑选阳性重组菌株,命名为:pMG36e-VP2-MG1363.使用诱导剂Nisin诱导表达,SDS-PAGE和Western Blotting鉴定重组蛋白.结果显示,成功构建重组表达载体pMG36e-VP2,SDS-PAGE,结果表明,重组目的蛋白分子大小约65 kD,与理论值相符;Western Blotting结果表明,重组目的蛋白可被犬源CPV阳性血清所识别,具有良好免疫反应性.本研究用乳酸菌成功表达犬细小病毒蛋白,为该病新型疫苗的研究提供基础.