前列腺特异性膜抗原启动子增强子调控重组质粒的构建及鉴定

摘要

目的探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子和增强子调控目的基因表达的前列腺细胞特异性,了解增强子增强转录效率的能力.方法采用PCR方法从前列腺癌细胞DNA中分别扩增PSMA启动子和增强子序列,先后克隆到含有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒载体,脂质体介导基因转染不同癌细胞并观察GFP在不同细胞的表达情况.结果成功构建质粒pEGFP-PS-MAPro和pEGFP-PSMAEP,转染结果显示PSMA表达阳性的LNCaP细胞中存在GFP的有效表达,且pEGFP-PSMAEP的调控转录能力较pEGFP-PSMAPro强20倍.结论PSMA启动子增强子调控GFP表达的重组质粒的构建证明该调控序列具有前列腺细胞特异性,增强子能够明显增强启动子的转录效率,增加了目的基因的表达水平.PSMA启动子和增强子的共调控可以保证基因表达的强度和细胞特异性,为前列腺癌基因靶向性治疗研究提供实验依据.