采用异种真皮去细胞基质复合脂肪间充质干细胞行尿道重建修复的实验研究

摘要

目的探讨异种真皮去细胞基质（acellular dermal matrix,ADM）种植脂肪间充质于细胞（adipose derived stem cells,ADSC）在兔的尿道重建修复中应用的效果。方法 2012年3-11月选取成年雄性新西兰白兔12只,体质量2.5~4.0 kg。体外构建长约1 cm的尿道缺损模型,随机分为实验组和对照组,每组6只。无菌条件下手术获取实验组的脂肪组织,体外原代培养获取第3代ADSCs,通过细胞形态学和流式细胞术对其进行鉴定;将ADSC种植于人来源的ADM上制成组织工程化尿道。实验组用组织工程化尿道行尿道重建修复,对照组单纯使用ADM重建修复。于术后3、6个月时,每组分别取3只行尿道造影后处死并取修复处尿道行组织学检查,通过HE染色及免疫组化染色方法,使用抗兔细胞角蛋白AE1/AE3抗体检测尿路上皮细胞生长情况及抗兔肌间蛋白抗体检测平滑肌细胞生长情况,评估尿道缺损重建修复的效果。结果光镜下见分离培养的ADSC呈不规则长梭形,大小较为均匀,细胞间有交互联系,呈巢状生长。流式细胞术鉴定:分离培养的ADSC阳性表达CD166、CD105、CD90、CD44,阴性表达CD45、CD13。两组术后均可通过尿道排尿,尿路造影检查示无狭窄形成。术后3个月组织学检查示实验组修复材料上有平滑肌细胞长入,对照组则未见平滑肌细胞,两组修复材料上均未见上皮细胞生长。术后6个月组织学检查示两组修复材料上均有平滑肌细胞长入,但对照组平滑肌细胞较少;实验组修复材料上可见上皮细胞生长,形成尿路上皮细胞层;对照组未见上皮细胞生长。结论应用组织工程学方法,在异种的ADM上种植ADSCs制成组织工程化尿道进行尿道缺损修复,可促进缺损处尿道的再生,改善尿道修复的效果。