特异性核酸内切酶检测结核分枝杆菌的乙胺丁醇耐药基因突变

摘要

目的探讨 Surveyor 酶法在结核分枝杆菌耐药基因突变中的应用。方法采用Surveyor 酶法检测结核分枝杆菌临床分离株60株,其中已经测序证实有 embB 基因突变的乙胺丁醇耐药株45株,无基因突变的敏感株15株。经聚合酶链反应扩增,杂交形成异源双链,Surveyor 酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳判断其有无突变存在。结果 15株敏感株均无 embB 基因突变,45株耐药株均存在 embB 基因突变热点306位密码子的点突变,其中33株为 ATG→GTG,3株为 ATG→ATT,5株为 ATG→ATA,2株为 ATG→ATC,2株为 ATG→CTG。经 Surveyor 酶法测定,45株 embB 基因突变株均呈现2条带形,15株敏感株均显示1条带形。结论 Surveyor 酶法与测序法的结果完全相符。采用 Sunreyor 酶法进行异源双链分析,具有简便、稳定、低耗、灵敏性和特异性高的特点。