骨形态形成蛋白4通过受体Ⅱ/Smad信号通路对瞬时受体电位离子通道蛋白表达的影响

摘要

目的观察骨形态形成蛋白（BMP）4对大鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）内Smad信号通路的影响,探讨其对瞬时受体电位离子通道（TRPC）蛋白1和6的作用。方法雄性Wistar大鼠6只,体重280~300 g,显微分离远端肺动脉酶消化法原代培养高纯度PASMCs,检测BMP4对于Smad信号通路的激活,利用BMP受体Ⅱ（BMPRⅡ）的小干扰RNA（SiRNA）,选择性抑制Smad信号通路,探讨BMP4/BMPRⅡ信号转导通路对TRPC1、6蛋白表达的影响,利用Western blot技术检测蛋白表达量。结果 BMP4作用于大鼠远端PASMCs,可以迅速激活Smad信号通路,而后随时间的延长逐渐减弱。BMPRⅡsiRNA转染大鼠远端PASMCs,能够有效地沉默BMPRⅡ蛋白表达,BMP4刺激转染后的PASMCs,Smad磷酸化水平较正常PASMCs低。BMPRⅡsiRNA转染降低了BMP4对TRPC1、6蛋白的促表达作用,与转染NT-目标SiRNA相比,在转染BMPRⅡSiRNA的PASMCs,BMP4处理后TRPC1蛋白表达与β-肌动蛋白的灰度值之比降低2.7倍（P＜0.05）;TRPC6蛋白表达与β-肌动蛋白的灰度值之比下降2.5倍（P＜0.05）。结论 BMP4可通过结合大鼠远端PASMCs的BMPRⅡ激活Smad信号转导途径,上调TRPC1、6蛋白的表达。