5-氮杂胞苷诱导间充质干细胞分化为成肌细胞的实验研究

摘要

目的探讨5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导间充质干细胞(MSCs)分化为成肌细胞的相关机制. 方法分离纯化4～6周龄Balb/C小鼠骨髓MSCs,以不同浓度5-Aza作用,用四唑盐(MTT)法测定细胞生长活力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定肌形成调节因子5(Myf5)、成肌素(myogenin)表达;免疫组织化学染色鉴定结蛋白(desmin)、肌凝蛋白(myosin)表达;观察细胞形态变化. 结果 1, 3 μmol/L 5-Aza对细胞增殖无明显影响,20 μmol/L 5-Aza对细胞有毒性作用,影响其增殖.10 μmol/L 5-Aza诱导后6 h,MSCs表达Myf5,9 h达最高;5 μmol/L 5-Aza诱导后9 h,MSCs表达Myf5,12 h达高峰.10 μmol/L 5-Aza诱导后24 h,MSCs表达myogenin,48 h达最高;5 μmol/L 5-Aza诱导后6 d,MSCs表达myogenin,且为高峰.10 μmol/L 5-Aza诱导后7 d,部分细胞表达desmin;14 d部分细胞表达myosin.10 μmol/L 5-Aza诱导后9 d,部分细胞胞体明显增粗,14～16 d后可见有肌管样细胞出现. 结论 5-Aza诱导MSCs向成肌细胞定向分化,可能是因其产生的去甲基化作用使MSCs中处于转录失活阶段的肌分化调控基因Myf5等得以表达,从而调控MSCs向肌细胞系定向分化并逐步表达myogenin,最后分化为肌管样细胞的过程.