新生大鼠脊髓损伤后大脑皮层cDNA文库中一条新基因的克隆及其相关蛋白功能的初步探讨

摘要

目的从已构建的新生大鼠脊髓损伤后大脑皮层再生相关基因文库中克隆并鉴定一条再生相关基因H3（CA854305）,并对其相关蛋白功能进行初步探讨。方法用Northe（?）印迹技术观察新基因在体内存在及其表达变化。并用电子克隆（in silico cloning）技术对该基因进行全长克隆,用DNAstar对所获序列进行生物信息学分析,用RT-PCR技术对最长的开放阅读框（ORF）进行初步验证。结果Northern印迹显示新生大鼠脊髓损伤后5 d,胚胎脊髓移植组对侧大脑皮层中的H3表达与损伤组和对照组比较,差异有统计学意义,移植组强于损伤组,损伤组强于对照组,提示H3可能与再生密切相关。电子克隆获得序列的最大长度为1 635 bp,最大ORF位于49～591 bp,结构分析符合Cozak规则。RT—PCR实验证实最大ORF序列。结论新生大鼠皮层神经元轴突中断后的再生过程中有H3基因表达增强,可能与神经元再生有关。