氧浓度非敏感性低氧诱导因子-1α表达载体的构建及其在PC12细胞系中的表达

摘要

目的构建大鼠非氧浓度敏感性低氧诱导因子1α（HIF-1α）真核表达载体并观察其在PC12细胞系中的表达。方法应用RT-PCR从脊髓损伤区域的细胞总RNA中扩增HIF-1αcDNA,采用重叠延伸PCR的方法克降获得缺失氧敏感性降解结构域（ODD）的HIF-1α突变体基因克隆,采用质粒pEGFP-C1构建重组真核融合表达载体,将其转入培养的PC12神经细胞系中,应用所融合的绿色荧光蛋白的表达和Western blot鉴定其在细胞内的表达。结果通过重叠延伸PCR的方法成功扩增得到非氧浓度敏感性的HIF-1α突变体基因（HIF-1α△ODD）序列,并构建了过量表达缺失ODD的转录调控因子HIF-1α突变体的重组表达质粒（pEGFPC1-HIF-1α△ODD）。将其转染PC12细胞系后,Western blot和绿色荧光蛋白结果均表明HIF-1α△ODD蛋白能在PC12神经细胞系中正确表达。结论成功构建了pEGFPC1-HIF-1α△ODD真核表达载体并在PC12细胞系中观察到融合蛋白表达。