两种方法制备脱细胞血管材料在动物体内免疫反应的比较

摘要

背景:去垢剂作为目前较成熟的脱细胞方法,具有操作简便、破坏小、实验条件容易控制等优点,有研究将不同的去垢剂联合应用于脱细胞中取得了不错的效果。目的:对比两种去垢剂联合方案脱细胞的效果,以及两种脱细胞血管材料植入动物皮下后的免疫反应。方法:采用两种方案对猪颈动脉进行脱细胞处理,一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%脱氧胆酸钠混合溶液内处理72h(SDS+SDC组),另一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%TritonX-100混合溶液内处理72h(SDS+Triton X-100组),脱细胞后分别进行组织学分析、扫描电镜分析、力学分析与DNA含量检测。将两组脱细胞血管材料分别植入SD大鼠背部皮下,术后1,2,4,8周取出移植血管材料,进行苏木精-伊红染色与免疫荧光染色。实验已通过江南大学实验动物伦理委员会批准。结果与结论:①组织学分析显示,SDS+SDC组方案有效去除了细胞成分,较完整的保留了细胞外基质结构,脱细胞效果优于SDS+Triton X-100组;②SDS+SDC组DNA含量明显低于SDS+Triton X-100组(P0.05);③扫描电镜显示,SDS+TritonX-100组细胞外基质破坏程度大于较SDS+SDC组;④皮下植入实验中,术后1周时两组颈动脉材料周围均可见大量炎性细胞浸润,术后8周时SDS+SDC组脱细胞材料周围已无炎性细胞浸润,SDS+Triton X-100组脱细胞材料周围仍可见明显的淋巴细胞浸润;SDS+TritonX-100组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M1型分化,SDS+SDC组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M2型分化;⑤结果表明相对比1%十二烷基硫酸钠联合1%Triton X-100脱细胞处理方案,1%十二烷基硫酸钠联合1%脱氧胆酸钠脱是较有前景的脱细胞细胞处理方案。