凋亡抑制基因Survivin的表达在肿瘤预后评估中的作用

摘要

目的:克隆、表达SVV基因,并探讨其在肿瘤预后中的作用。方法:从人白血病细胞系HL60提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出SVV基因片段。将SVV基因片段插入载体pGEM-TEasy中,经全自动序列分析仪测序正确后用NdeⅠ/XhoⅠ双酶切,亚克隆到原核表达载体pRSET-C中,构建重组表达载体pRSET-c-SVV,并转化大肠杆菌BL21菌株。取工程菌,经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定并初步纯化。结果:经RT-PCR,测序和酶切鉴定,成功地克隆了人SVV基因;经IPTG诱导的重组质粒pRSET-C-SVV表达出相对分子质量约为16500u的蛋白,与预期的结果相符。结论:成功克隆了人肿瘤细胞的抗凋亡基因SVV,并在大肠杆菌BL21中表达出SVV蛋白。该基因的高效表达为进一步探讨以SVV为基础的肿瘤的防治及预后判断提供工具。