同型半胱氨酸通过核因子κB途径诱导人内皮细胞表达RANTESmRNA和蛋白的表达

摘要

目的:观察同型半胱氨酸诱导培养人脐静脉内皮细胞表达RANTESmRNA及蛋白,并分析其机制。方法:实验于2004-11/2005-11在新乡医学院分子生物研究室完成。①采用酶消化法分离脐静脉内皮细胞。②当脐静脉内皮细胞生长至汇合状态时,随机分为对照组、同型半胱氨酸组和二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组。对照组用无血清培养基、同型半胱氨酸组用含0.1mmol/L同型半胱氨酸的无血清培养基培养,分别孵育8h;二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组用含100μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷的无血清培养基培养20min后,再加入0.1mmol/L的同型半胱氨酸孵育8h。③采用斑点杂交检测脐静脉内皮细胞中RANTESmRNA的表达。④采用Westernblot检测脐静脉内皮细胞中RANTES蛋白的表达。⑤用免疫细胞化学方法检测正常对照组和同型半胱氨酸组核因子κBP65蛋白的表达。结果:①脐静脉内皮细胞中RANTESmRNA的表达:图像分析显示,同型半胱氨酸组、二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组的积分吸光度值分别为18790和16420,分别为对照组(积分吸光度值为12680)的1.48倍和1.29倍。②脐静脉内皮细胞中RANTES蛋白的表达:图像分析显示,同型半胱氨酸组RANTES蛋白印迹条带的积分吸光度值为0.7942,而二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组的积分吸光度值为0.5013,分别是对照组(0.2930)的2.72倍和1.72倍。③脐静脉内皮细胞中核因子κBP65蛋白的表达:在对照组脐静脉内皮细胞中,核因子κBP65蛋白的表达以细胞质为主;同型半胱氨酸刺激后,细胞核染色的阳性率明显增加,由对照组的8.3%上升到43.5%(P<0.01)。结论:同型半胱氨酸能诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTESmRNA和蛋白,核因子κB可能参与了该过程。同型半胱氨酸可能通过诱导内皮细胞表达RANTES在动脉粥样硬化形成中起作用。