不同温度条件下体外培养小鼠皮质神经元形态及骨架蛋白的表达

摘要

目的:观察不同温度条件下体外培养的小鼠皮质神经元的形态及其骨架蛋白表达的变化,以及与热休克蛋白70的关系。方法:实验于2005-02/06在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室完成。①选取孕15～18d昆明种二级孕鼠1只,处死后取胎鼠的大脑皮质进行神经元原代培养,培养第7天经鉴定的神经元用于实验,随机分为高温处理组和正常对照组。②高温处理组建立热应激损伤模型,将培养好的神经元移入经乙醇消毒的全自动水浴加热器,分别于38,39,40,41,42℃处理30min。正常对照组不造模,于37℃对神经元进行常规培养。③两组均随机选取3个细胞爬片,应用倒置相差显微镜观察刺激后神经元的形态变化,应用激光共聚焦扫描观察不同温度刺激后神经元中骨架蛋白、热休克蛋白70的表达变化。结果:①两组培养的神经细胞光镜观察结果:培养7d时正常对照组细胞光晕明显,胞体饱满并聚集成团,细胞团间有粗大的突起并相互连接,神经网络稠密;高温处理组38℃时漂浮细胞增加,神经网络稀疏。39℃时部分细胞坏死。42℃大部分细胞出现坏死,胞体碎裂,突起漂浮或消失。②培养神经细胞的纯度鉴定结果:培养7d的神经细胞,荧光显微镜下可见神经元及突起为绿色荧光,突起一至两个不等,计算结果显示培养细胞中神经元占(82.0±1.9)%。③不同温度条件下两组骨架蛋白及热应激蛋白荧光强度的变化:高温处理组38,39,40,41,42℃热刺激后骨架蛋白荧光强度低于正常对照组,且温度愈高降低愈明显。热休克蛋白70荧光强度呈钟形分布,39℃最高,37,42℃最低。结论:高温可以导致神经元形态变化,其中骨架蛋白结构紊乱可能是神经元形态变化的原因之一,热休克蛋白70可能参与其中。