地黄管食通口服液对放射治疗食管癌细胞凋亡及相关调控基因蛋白的影响

摘要

目的:观察以养阴润燥、清热解毒为基本治法组方的中药复方制剂地黄管食通口服液对放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡的影响,分析该口服液作用机制.方法:实验于2004-11/2005-08在郑州大学动物实验中心SPF级实验室(动物实验)和郑州大学分子医学重点实验室(其他实验)完成.①选用清洁级Wistar大鼠125只,6～8周龄,雌雄不拘.取20只大鼠作为空白对照组;其余大鼠均皮下注射甲基戊基亚硝胺溶液5 mg/kg造成食管癌模型,每周1次,连续16周,每周称体质量1次,根据体质量增长调节注射给药量.末次大鼠注射给予甲基戊基亚硝胺溶液后,除20只大鼠(模型组)外,将其余造模大鼠用氯胺酮腹腔注射麻醉(0.1g/kg,2 mL/kg),应用60Co放射治疗机进行大鼠食管局部60Co照射,剂量为2 Gy/d,连续5 d.②末次照射24 h后,分别给予相应受试药物,动物分组及给药情况如下:空白对照组(n=20):灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);模型组(n=20):灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);放疗组(n=17):灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);六味地黄丸组(n=17):灌胃六味地黄丸(成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹皮、茯苓;河南宛西制药股份有限公司生产,批号:20010691;9 g/粒)生药含量4.5 g/(kg·d);地黄管食通口服液低、中、高剂量组(n=17):灌胃地黄管食通口服液(地黄管食通口服液:成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹疫、茯苓、山豆根、冬凌草;由河南中医学院第一临床医学院制剂中心提供,批号:020117;10 mL/支)生药含量0.5,1.0,1.5g/(kg·d).每组均干预5周.③采用原位末端标记法检测细胞凋亡情况,计数细胞凋亡比例的均数为凋亡指数.④采用免疫组化方法检测P53,Bcl-2蛋白表达:P53和Bcl-2蛋白阳性反应均呈棕黄色颗粒,按显色有无及阳性细胞多少可分为4个等级:阴性(-):整个切片未见阳性染色;弱阳性(+):阳性细胞数＜25%;中度阳性(++):阳性细胞数25%～50%;强阳性(+++):阳性细胞数＞50%.⑤两组计量和计数资料差异比较采用t检验和x2检验.结果:纳入125.只大鼠,各组取10只用于结果分析.①细胞凋亡指数:地黄管食通各剂量组明显高于模型组(P＜0.05～0.01),六味地黄丸组和地黄管食通各剂量组明显高于放疗组(P＜0.05～0.01).②P53蛋白表达阳性率:模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组(P＜0.05～0.01).地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组(P＜0.05～0.01),以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显(P＜0.01).③Bcl-2蛋白表达阳性率:模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组(P＜0.05～0.01).地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组(P＜0.05～0.01),以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显(P＜0.01).结论:地黄管食通口服液可促进放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡,该作用发生可能与抑制P53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达有关.