蛋白酶体抑制剂对多巴胺能神经元的可能保护作用

摘要

目的:分析蛋白酶体抑制剂Iactacystin(乳胞素)与多巴胺能神经元变性死亡的关系,为帕金森病的治疗探索新的思路.方法:实验于2005-03/11在国家人类基因组北方研究中心完成.实验细胞人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y由北京神经科学研究所提供.用50 μmol/L 6-羟基多巴胺处理的多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y作为帕金森病的细胞模型,于对数生长期时接种到培养皿、6孔板、96孔板中,24 h后分不同组给药处理:对照组,50 pmol/L 6-羟基多巴胺组,50 μmol/L 6-羟基多巴胺加0.1 μmol/Llactacystin组、50 μmol/L 6-羟基多巴胺加0.25 μmol/L lactacystin组、50 μmol/L 6-羟基多巴胺加0.5 μmol/Llactacystin组.镜下细胞计数,计算细胞存活率=活细胞数/对照组活细胞数×100%.磺酰罗丹明B法测定细胞活力,在酶联免疫检测仪测定吸光度值,检测波长为540 rm.吸光度值=实验组细胞孔吸光度值-空白孔细胞吸光度值.取8复孔读数均值.细胞活性=实验孔吸光度值/平行对照孔吸光度值×100%结果:①50 μmol/L 6-羟基多巴胺组对细胞有明显毒性,细胞存活率与对照组相比只有(51.31±3.52)%,加用0.1,0.25,0.5 μmol/L lactacystin后,细胞存活率分别提高到(72.16±3.97)%,(82.36±3.78)%,(91.44±3.06)%,各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).而单用0.5 μmol/L的lactacystin对细胞存活率无明显影响.②50 tμmol/L 6-羟基多巴胺组对细胞有明显毒性可表现为细胞数量的减少,6-羟基多巴胺组细胞存活率只是对照组的(47.33±3.25)%,加用0.1,0.25,0.5μmol/L的lactacystin后,细胞存活率分别提高到(69.67±2.13)%,(80.38±1.12)%,(90.59±2.01)%,各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).而单用0.5 μmol/L的lactacystin对细胞存活率无明显影响.③正常培养的神经元细胞密度大,轮廓清晰,突起明显,胞体折光性好,6-羟基多巴胺处理的神经元,多数细胞死亡,残存细胞突起缩短或消失,胞体皱缩,轮廓不清,胞体折光性差,6-羟基多巴胺加lactacystin处理的细胞细胞密度和形态介于前二者之间.结论:蛋白酶体抑制剂对多巴胺能神经元有保护作用,可能是通过阻断细胞凋亡,但确切机制有待于进一步的研究.