SARS患者康复期淋巴细胞功能状态及T细胞受体Vβ24个亚家族表达的格局(英文)

摘要

背景:严重急性呼吸道综合征(severe acuterespi ratory syndrome,SARS)是由SARS相关冠状病毒感染引起的急性传染性疾病。但目前其康复期患者细胞免疫状态仍有待进一步研究。目的:观察SARS患者康复期淋巴细胞功能状态和T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族表达的格局。设计:前后对照观察。单位:广东省中医院中心实验室。对象:选择2003-01/04在广州中医药大学第二附属医院收治的76例治愈的SARS患者,全部病例均符合"非典型肺炎的临床诊断标准"、"非典型肺炎重症病例诊断标准、出院标准"及《中医临床诊疗术语证候部分》的诊断标准,男30例,女46例,平均(32±11)岁。选择10名同期健康到院体检者,女5名,男5名,平均(32±7)岁,所有受试对象对检测项目知情同意。方法:①TCRVβ24个亚家族的表达检测:取受试对象全血2mL,用EDTA-K2抗凝管抗凝。在流式细胞术检测专用管中,分别加入各种荧光素标记的mAb:抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD28、抗HLA-DR、PC5-抗CD3mAb、TCRVβ1(PE+FITC)、Vβ2(PE+FITC)、Vβ3(FITC)、Vβ4(PE+FITC)、Vβ5.1(PE+FITC)、Vβ5.2(PE)、Vβ5.3(PE)、Vβ7.1(PE+FITC)、Vβ7.2(FITC)、Vβ8(FITC)、Vβ9(PE)、Vβ11(PE)、Vβ12(FITC)、Vβ13.1(PE)、Vβ13.2(PE)、Vβ13.6(PE+FITC)、Vβ14(FITC)、Vβ16(FITC)、Vβ17(PE+FITC)、Vβ18(PE)、Vβ20(FITC)、Vβ21.3(FITC)、Vβ22(PE+FITC)和Vβ23(PE)10μL,然后加入抗凝血50μL。混匀后,于室温避光孵育15min,再加入溶血素溶血、洗涤。最后将沉淀溶在300μLPBS中,用CoulterESP流式细胞仪进行检测。②T细胞亚群,T、B细胞的活化状态及Ts细胞和Tc细胞百分率的检测:每次收集5000个细胞,用仪器所带软件分别计算T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)、活化的T、B细胞(CD3+/CD25+、CD3+/HLA-DR+、和CD3-/HLA-DR+)、Ts细胞和Tc细胞(CD8+/CD28+、CD8+/CD28-)的百分率。主要观察指标:①T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)的表达。②活化的T、B细胞(CD3+/CD25+、CD3+/HLA-DR+、和CD3-/HLA-DR+)的表达。③Ts细胞和Tc细胞(CD8+/CD28+、CD8+/CD28-)的百分率。④TCRVβ24个亚家族的表达。结果:所有受试对象均进入TCRVβ24个亚家族检测结果分析,74例SARS患者及健康对照者10名均进入其余检测结果分析。①T细胞亚群的检测结果:CD4+细胞的百分率均数低于参考值[(33.33±6.64)%,(43±9)%,P<0.01],CD8+细胞的百分率高于参考值[(34.07±6.40)%,(30±9)%,P<0.01]。②活化的T、B细胞表达检测:表达HLA-DR的T、B细胞增加,而表达CD25的T细胞减少。有53例CD25+细胞的百分率低于正常参考值,有64例CD3+/CD25+T细胞的百分率低于正常参考值。只有CD3+/HLA-DR+和CD3-/HLA-DR+细胞的百分率高于正常参考值,其中表达CD3+/HLA-DR+的T细胞增加36例,表达CD3-/HLA-DR+的T细胞增加30例。③Ts细胞和Tc细胞的百分率:Ts细胞(CD8+/CD28-)的百分率较参考值增高[(28.75±7.31)%,(15.99±5.1)%,P<0.01];Tc细胞(CD8+/CD28+)的百分率则低于参考值[(5.99±3.60)%,(13.2±4.1)%,P<0.01]。其中有39例Tc细胞的百分率降低,有48例Ts细胞的百分率升高,CD4+与CD8+T细胞的比值均在正常参考值范围内。④TCRVβ24个亚家族表达:康复期SARS患者TCRVβ24个亚家族表达中,TCRVβ14的表达最高,TCRVβ5.3、和23表达次之,出现TCRVβ24个亚家族表达的不同。正常对照组中只有TCRVβ14表达最高,与SARS患者的结果相一致,但TCRVβ24个亚家族的分布格局不同。两组进行比较,Vβ1、Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ11、Vβ13.1、Vβ13.2、Vβ17、Vβ18、Vβ22和Vβ23的表达差异显著,康复期SARS患者组均高于正常对照组(P<0.05-0.01)。结论:康复期SARS患者CD8+CD28-T细胞数的升高可导致CD8+T细胞数升高;而Ts细胞数的增加,因其分泌的抑制因子增多,从而造成CD3+和CD4+T细胞数降低。SARS患者康复期TCRVβ24个亚家族在T细胞上的表达不同。CD3+/HLA-DR+和CD3-/HLA-DR+T细胞数的升高,可能与T、B细胞的活化较晚有关。