获得性免疫反应与海人藻酸引起的C57BL/6小鼠海马损伤的关系(英文)

摘要

背景:海人藻酸引起在啮齿类动物的海马损伤是用于研究人类神经退行性病变的优质模型。虽然许多研究已证实炎症分子和反应参与并且促进了疾病的进程,但是否获得性免疫反应,尤其是免疫活性细胞,如T细胞和B细胞是否参与了神经退行性病变尚不清楚。目的:观察B和T细胞亚型在海人藻酸引起的海马神经元退行性病变中的作用。设计:随机对照动物实验。单位:吉林大学第一医院耳鼻喉头颈科和神经内科,瑞典卡若林斯卡医学院Huddinge医院神经医学系老年科。材料:实验于2000-06/09在瑞典KarolinskaInstitute医学院神经医学系完成。选用20只的雄性C57BL/6小鼠(野生型),同样基因背景的雄性CD4(-/-),CD8(-/-),CD4/CD8(-/-)和Igh-6(-/-)基因敲除C57BL/6小鼠分别为17,19,15,14只,鼠龄5￣6周,体质量18￣20g。3只鼠龄和体质量相匹配的C57BL/6小鼠经鼻给水作为对照。试剂和仪器:海人藻酸购自Sigma,USA。双色流式细胞仪和CellQuest购自BectonDickinson,CA,USA。方法:①所有小鼠经麻醉后,按48mg/kg剂量将7.69g/L海人藻酸滴入85只小鼠双侧鼻孔中。3只对照小鼠鼻内滴入等量水。②观察小鼠临床症状,临床症状分级如下:0￣6分,0分:正常;6分:死亡。③给予海人藻酸4.0￣5.0h后,采用流式细胞术测定脾细胞表面标记的表达。④给药7d后,麻醉所有小鼠,取脑,固定,包埋。采用尼氏染色方法评估(海马)切片神经元形态,判断神经细胞和神经退行的严重程度。应用半定量系统,即病理评分判断神经细胞和神经退行性病变的严重程度:0￣6分,0分:正常;6分:重度神经元脱失(CA3区有>40%神经元脱失)。⑤多组间差异比较采用单因素方差分析,两组间差异比较采用t检验。主要观察指标:各组小鼠临床级别、海马神经病理学改变和脾细胞表面细胞分子表达。结果:小鼠85只均进入结果分析。①临床级别:所有CD4(-/-)小鼠表现出严重癫痫发作,其临床级别明显高于野生型小鼠(P<0.01)。CD4/CD8(-/-)小鼠临床级别明显低于野生型小鼠(P<0.01)。而CD8(-/-)andIgh-6(-/-)临床级别与野生型小鼠无明显差异。对照小鼠无临床症状。②海马神经病理变化:CD4/CD8(-/-)小鼠病理变化最轻(病理级别最低),而Igh-6(-/-)小鼠海马CA3区病理损害较CD8(-/-)小鼠和野生型小鼠更为严重。③脾细胞亚群变化:CD8(-/-)鼠和野生型鼠CD4+T细胞百分比明显升高(给药前后分别为8.4%,14.2%;18.2%,31.5%);Igh-6(-/-)小鼠CD8+T细胞升高(给药前后分别为2.1%和7.4%);CD4(-/-)鼠B细胞升高(给药前后分别为22.7%,32.8%)。结论:获得性免疫反应参与海人藻酸引起的小鼠海马神经元退行性病变,B细胞和T细胞亚型在海人藻酸引起的海马损伤中起到不同作用。