小鼠异基因骨髓移植继发急性移植物抗宿主病细胞因子的表达

摘要

背景：急性移植物抗宿主病仍然是限制异基因造血干细胞移植临床应用的主要障碍之一，已证实造成发病的首要因素是转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α、干扰素γ等分泌异常。目的：拟通过建立小鼠异基因骨髓移植模型诱导急性移植物抗宿主病反应，检测外周血血清中Th1及Th2型代表因子干扰素γ、白细胞介素4的表达水平，分析其与急性移植物抗宿主病严重程度的关系。设计、时间及地点：随机对照体内移植实验，于2005-08／10在北京口腔医院动物部及首都医科大学附属北京友谊医院完成。材料：清洁级C57BL/6（H-2^b）雄鼠20只作为供鼠用于制备骨髓细胞及脾脏淋巴细胞，BALB／c（H-2^d）雌鼠50只作为受鼠，随机分为正常对照组10只、骨髓细胞移植组20只、混合移植组20只。方法：骨髓细胞移植组、混合移植组均给予总剂量9．0Gy的6MV—X射线照射，前者经尾静脉单纯输入异基因骨髓细胞2．0×10^7个，后者混合输入异基因骨髓细胞、脾脏淋巴细胞各2．0×10^7个。主要观察指标：记录小鼠生存时间，计数外周血白细胞，ELISA法测定移植后不同时间外周血血清中细胞因子水平，苏木精-伊红染色观察组织病理学变化。结果：骨髓细胞移植组从第8天开始出现死亡，混合移植组从第4天开始出现死亡，前者平均生存时间明显长于后者，Kaplan—Meier法检验P〈0．05。移植后第7天，骨髓细胞移植组白细胞数明显低于混合移植组（P〈0．05），第14，21天两组白细胞数比较差异无显著性意义（P〉0．05）。与骨髓细胞移植组比较，移植后第7，14天混合移植组白细胞介素4水平明显降低（P〈0．05，P〈0．01），干扰素γ水平明显升高（P〈0．05）。骨髓细胞移植组镜下可见肝细胞轻度变性，小肠有少量淋巴细胞浸润，病理分级为Ⅰ、Ⅱ级。混合移植组肝细胞呈不同程度的变性或坏死，小肠绒毛坏死脱落，黏膜下层大量淋巴细胞浸润，病理分级为Ⅲ～Ⅴ级。结论：随着急性移植物抗宿主病程度的加重，血清白细胞介素4水平明显下降，干扰素γ水平显著升高，尤其在发病早期两种细胞因子变化更为明显。