大鼠气管干细胞增殖分化过程中Wnt／β-Catenin信号分子的表达

摘要

背景:干细胞和细胞外基质的互相作用需要Wnt信号途径的参与。在气管损伤后的修复过程中,不同的分子信号级联控制干细胞的迁移、增生与分化,Wnt信号途径是否参与其中?目的:检测并验证Wnt/β-Catenin信号途径在气管干细胞增殖分化中的作用。设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2004-05/2006-07在沈阳医学院完成。材料:2周龄Wistar大鼠,雌雄不拘,作为离体气管来源。方法:实验组以含氟尿嘧啶的HamsF12培养液作用离体大鼠气管,作用12h后换成单纯Hams F12液,对照组只用Hams F12液培养。主要观察指标:去除氟尿嘧啶后于0,6,12,24,48h采用免疫组织化学SP染色及蛋白印迹法检测气管上皮中Wnt-1和β-Catenin的表达。结果:氟尿嘧啶作用12h后,大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,暴露出基底膜,仅剩余少数较分散的间隔分布的近于裸核的细胞,呈钉状位于基底膜上。氟尿嘧啶去除6h后,气管基底膜上可见少量扁平样细胞。24h后基底膜上细胞数目增加,并逐渐分化呈立方状,连接成片。48h后气管上皮中出现假复层柱状上皮,并可见纤毛细胞。免疫组织化学及蛋白定量结果显示:正常及损伤后0h气管上皮极少量表达Wnt-1及β-Catenin,损伤后6hWnt-1及β-Catenin表达最强,其后随时间延长,表达逐渐减少。结论:Wnt-1时间依赖性表达与气管上皮损伤修复进程相吻合,胞浆中游离状态的β-Catenin表达可能产生了促进气管干细胞的增殖并抑制其分化的作用。