脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞/前体细胞的增殖与分化

摘要

目的：目前认为大脑和脊髓中有内源性神经干细胞／前体细胞存在，但脑和脊髓损伤后这些内源性神经干细胞／前体细胞的活化、增殖、分化机制仍不清楚。应用5-溴2-脱氧尿嘧啶核苷（5-brom02-deoxyuridine，BrdU）体内标记的方法，观察了大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞／前体细胞的增殖、分化变化过程。方法：实验于2007—04／09在珠江医院中心实验室进行。①实验材料：36只同一窝别雌性SD大鼠由南方医科大学动物实验中心提供，体质量200～220g，按照随机数字表法将大鼠分为对照组、预标记组和损伤后标记组，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：采用Allen法建立脊髓损伤模型，损伤后连续10d腹腔注射Brdu来标记损伤后活化增殖的细胞：对照组采用Brdu连续10d腹腔注射，以标记脊髓内保持分化活力的细胞；预标记组在Brdu连续10d腹腔注射标记后，于第12天进行脊髓损伤。③实验评估：采用免疫组织化学法检测Brdu标记的内源性神经干细胞／前体细胞增殖情况。结果：①对照组可见整个脊髓切片均有大量的Brdu阳性细胞存在，这些细胞主要分布于脊髓外侧区域。②与对照组比较，预标记组Brdu阳性细胞在损伤后1d明显减少，7d后增多，21d后逐渐恢复并超过对照组水平。③损伤后标记组在损伤后1d即见大量Brdu阳性细胞增殖，阳性细胞数亦较预标后损伤1d时明显增多，损伤后7dBrdu阳性细胞数达到高峰，并超出对照组水平，这些细胞分布于损伤周围的灰质及室管膜区，但在损伤后21d，Brdu阳性细胞数未见继续增加。与对照组相比，损伤后标记组有较多的巢蛋白阳性细胞在室管膜区表达，1d即有增加，在7d达到高峰，21d减少。结论：脊髓损伤后出现明显的细胞增殖、分化反应，主要存在损伤后1周以内，1d即可见明显增生，尤以7d时明显，21d保持平稳，这些细胞主要分布在损伤脊髓中央管周围的室管膜区和损伤区域周围。