干细胞因子和粒细胞集落刺激因子联合动员小鼠外周血培养间充质干细胞的生物学特性

摘要

目的：粒细胞集落刺激因子和干细胞因子是血细胞生成过程中的两个重要细胞因子,由于两者协同作用通过细胞内信息传导改变或阻断干细胞的黏附分子表达,增加其数量并抑制细胞凋亡,改变骨髓间充质干细胞功能。联合利用两者动员小鼠外周血,培养间充质干细胞,并探讨在体外单层培养条件下向软骨细胞方向诱导的条件。方法：实验于2005-01/2006-03在河北医科大学第四医院科研中心河北省重点实验室完成。①实验材料：BALB/C小鼠,4-6周龄,雄性,体质量15-20g,由河北医科大学实验动物中心提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：利用密度梯度离心结合贴壁法,从经粒细胞集落刺激因子和干细胞因子动员后的BALB/C小鼠外周血分离培养间充质干细胞,取生长良好的细胞进行克隆形成能力检测,并应用流式细胞分析结合免疫组化方法鉴定。同时利用含有转化生长因子β1的高糖DMEM培养液诱导第3代间充质干细胞向软骨细胞分化,应用免疫组织化学方法检测Ⅱ型胶原表达情况。结果：①从外周血培养出的间充质干细胞与骨髓来源间充质干细胞表型相似,并可以向软骨细胞分化。流式细胞分析结果显示,细胞表达相关的抗原标记CD29和CD44,不表达造血细胞系的表面标志CD34和CD45。②免疫组织化学显示,第3代间充质干细胞Ⅱ型胶原、层黏连蛋白表达为阴性,波形蛋白为阳性。诱导后的间充质干细胞Ⅱ型胶原表达为阳性。③P1、P3、P53代细胞的克隆形成率不同,两两比较显示随着代数的增加,克隆形成率逐渐降低（21.32%,16.13%,9.63%,P〈0.01）。结论：经干细胞因子和粒细胞集落刺激因子动员后的外周血中可以得到一定数量并且纯度较高的间充质干细胞,细胞在体外生长较活跃,并在特定培养液的诱导下可以向软骨细胞表型转化,但细胞传代次数较低。