石蜡包埋组织提取DNA不同条件下的PCR扩增

摘要

背景：在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中会对DNA 造成损害,提取的DNA 在用于PCR 扩增时部分结果并不理想.目的：比较分析石蜡包埋组织中提取DNA 应用于PCR 反应的影响因素.方法：从10.0 μm×2、10.0 μm×4 和10.0 μm×5 石蜡包埋食管癌组织切片中提取DNA,以0.05,0.1,0.2 μg 模板DNA量扩增内参基因β-actin,PCR 反应循环次数分别为35,40,45 次,分析影响PCR 反应的因素.结果与结论：琼脂糖凝胶电泳结果显示以10.0 μm×2 组织切片量,PCR 反应循环次数40 次,PCR 反应模板DNA 量0.05 μg 扩增取得的目的基因DNA 的质量最高.说明减少石蜡包埋组织用量和减少模板DNA 量有助于获得高质量的PCR反应条带,且PCR 反应循环次数应大于40 次,小于45 次,再增加循环次数,则意义不大.