人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较

摘要

背景：近年来“无细胞”的干细胞治疗方法备受关注，但对于提取高质量外泌体的方法尚无确切定论。目的：采用3种方法提取人脐带间充质干细胞中的外泌体，筛选最佳提取外泌体的方法。方法：分别用Total Exosome Isolation试剂盒、Exo Quick试剂盒及差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞来源的外泌体。使用透射电镜观察外泌体形态，BCA法进行蛋白质定量，western blot检测外泌体表面标志物CD9、CD81、CD63的表达。结果与结论：①3种方法均可以从培养基中提取到间充质干细胞来源的外泌体，并且在透射电镜下观察到圆形或椭圆形的膜性小囊泡；②差速超速离心法提取的外泌体中的蛋白浓度和纯度最高，Exo Quick试剂盒法其次，Total Exosome Isolation试剂盒法得到的蛋白浓度最低，且3者比较差异有显著性意义(P<0.05)；③3种方法提取的外泌体均表达其表面特异性标志物CD81、CD63和CD9，且在含有相同蛋白浓度的情况下，差速超速离心法提取的外泌体的表面标志物含量最高，Exo Quick试剂盒法其次，Total Exosome Isolation试剂盒法提取的外泌体表面标志物含量较低；④差速超速离心法和Total Exosome Isolation试剂盒法的操作时间明显多于Exo Quick试剂盒法，差异有显著性意义(P<0.05)；⑤结果表明，尽管差速超速离心法耗时稍长，但是纯度相对较高，满足实验的基本需求，可作为一种合理的分离方法。