六味地黄丸对钛颗粒诱导骨溶解成骨影响的机制

摘要

背景:目前已有大量研究发现六味地黄丸可用来治疗骨质疏松,而鲜有关于六味地黄丸对磨损微粒诱导的成骨细胞分化与矿化方面的相关研究。目的:探讨不同浓度六味地黄丸含药血清对钛颗粒诱导的小鼠MC3T3-E1成骨细胞体外骨溶解模型的积极作用。方法:大鼠口服六味地黄丸后提取含药血清,筛选六味地黄丸含药血清和钛颗粒对MC3T3-E1细胞活力影响的最佳浓度。将MC3T3-E1细胞为3组:空白组给予成骨分化培养;模型组给予钛颗粒(5μg/mL)+成骨分化培养;加含药血清组给予钛颗粒(5μg/mL)+六味地黄丸含药血清(分为10%,15%,20%剂量)共培养+成骨诱导。通过CCK-8法检测成骨细胞活力,碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶活性,通过硝酸银(Von Kossa)和茜素红染色检测细胞矿化情况,qRT-PCR检测成骨分化相关基因Runx-2、Osterix、Ocn、Axin、ALP和Opn的表达,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β、Runx2和Osterix蛋白表达。结果与结论:①六味地黄丸含药血清培养可以逆转钛颗粒诱导的MC3T3E-1细胞碱性磷酸酶活性的降低,增加MC3T3E-1细胞茜素红染色及钙化结节,增加MC3T3E-1细胞成骨相关基因的表达,同时提高Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。②结果说明,六味地黄丸含药血清体外可以逆转钛颗粒对成骨细胞分化矿化的抑制作用,上调成骨相关基因的表达,其机制与调控Wnt/β-catenin信号通路相关,提示六味地黄丸有望成为防治人工关节无菌性松动的有效药物。