抗CD3单抗诱导CD4＋FoxP3＋调节性T细胞分化并缓解小鼠肺移植急性排斥

摘要

目的 建立小鼠原位左肺移植模型,探究抗CD3单抗缓解肺移植急性排斥损伤的作用机制,为其在临床肺移植的应用提供理论依据。方法 选取SPF级野生型BALB/c和C57BL/6小鼠,构建原位左肺移植模型,设置同种同型对照组（C57BL/6→C57BL/6,6只）、同种异型对照组（BALB/c→C57BL/6,6只）,同种异型单抗处理组（BALB/c→C57BL/6,4只）。术后第2～6天及第9天每日腹腔注射50 g抗CD3单抗。采用苏木精-伊红、马松染色以及CD3/髓过氧化物酶（MPO）免疫组化染色,观察各组移植肺T淋巴细胞和中性粒细胞浸润分布情况,进行急性排斥病理评分；实时荧光定量RT-PCR检测移植肺组织转录因子FoxP3和细胞因子IL-17A、IFN-γ的mRNA表达水平；流式细胞术检测受体小鼠脾脏中FoxP3＋调节性T细胞（Treg）占CD4＋ T细胞的比例。结果 移植术后10天,同种同型组移植肺外观呈淡红色,柔软有弹性,病理学检测未见明显的炎症细胞浸润和组织损伤；同种异型对照组移植肺外观呈绛紫色,硬度增加；同种异型单抗处理组外观淡红柔软,与同种异型对照组比较,淋巴细胞、中性粒细胞浸润显著减少,急性排斥损伤病理评分降低。实时荧光定量RT-PCR结果显示,与同种同型组相比,同种异型组移植肺中IL-17A和IFN-γmRNA的表达水平升高；抗CD3单抗可降低移植肺中IL-17A与IFN-γmRNA表达水平,升高FoxP3mRNA表达水平。流式细胞术结果显示,与同种同型、同种异型对照组相比,单抗处理组小鼠脾脏中Treg占CD4＋ T细胞的比例显著升高。结论 抗CD3单抗可诱导CD4＋ FoxP3＋Treg的分化并缓解肺移植急性排斥损伤。