WWOX在胆管癌组织中的表达及其对胆管癌细胞生物学行为的影响

摘要

目的研究抑癌基因WWOX表达对胆管癌RBE细胞生长的影响。方法采用免疫组化方法检测2005年7月至2010年5月54例胆管癌组织、12例正常胆管组织中WWOX蛋白表达水平。将携有WWOX基因的真核表达载体转染胆管癌细胞系RBE细胞（RBE/WWOX组）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染空载质粒（RBE/con组）及未经转染（自然生长组）的RBE细胞作为对照。荧光定量RT-PCR和Western Blot法检测WWOX在RBE细胞中的表达情况;噻唑蓝实验检测转染前后各组细胞增殖活性;FCM法检测各组细胞的凋亡;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位;Transwell小室侵袭实验检测各组肿瘤细胞侵袭力;荧光定量RT-PCR和Western Blot法检测胆管癌细胞bcl-2、bax、FasL、caspase-3表达的变化。结果 WWOX在胆管癌中的表达低于正常胆管组织（P＜0.05）,蛋白表达的缺失频率为40.7%。建立稳定表达WWOX基因的RBE/WWOX细胞株,mRNA及蛋白表达明显增加。转染后的RBE细胞噻唑蓝吸光度明显下降（P＜0.05）。与自然生长组和RBE/con组比较,FCM显示RBE/WWOX组细胞的凋亡率明显增高（P＜0.01）,JC-1显示转染后的线粒体膜电位下降（P＜0.01）,侵袭实验显示转移至下室滤膜的细胞数明显减少（P＜0.01）。荧光定量RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA表达是自然生长组的0.12倍,bax、caspase-3 mRNA分别是自然生长组的4.72和2.57倍,FasL mRNA的表达无明显变化;Western Blot法检测发现bcl-2蛋白的表达降低,bax、caspase-3蛋白表达升高,FasL无明显变化。结论抑癌基因WWOX通过诱导胆管癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用。