牙龈卟啉单胞菌脂多糖通过髓样细胞触发受体-1调控巨噬细胞极化状态的研究

摘要

目的探究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激巨噬细胞后,髓样细胞触发受体-1（triggering receptors expressed on myeloid cells-1,TREM-1）表达与M1、M2型极化的关系,进一步探讨巨噬细胞TREM-1在牙周炎发生发展中的作用机制。方法使用豆蔻酰佛波醇乙酯诱导人单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,予以0（空白对照组）和1 μg/ml 的 Pg-LPS（LPS组）刺激,同期加入终质量浓度为0.1 μg/ml的TREM-1抑制剂LP17（LPS+LP17组）或对照肽（LPS+对照肽组）,培养24 h后用实时荧光定量PCR（real-time quantitative-PCR,RT-qPCR）检测TREM-1和巨噬细胞M1、M2型极化标志物（分别为CD86、CD206）及其极化相关细胞因子[分别为肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-10]mRNA表达变化,蛋白质印迹法检测TREM-1、CD86、CD206蛋白含量,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达。结果细胞培养24 h后,LPS组巨噬细胞中TREM-1相对 mRNA表达量（1.40±0.14）及蛋白表达量（3.85±0.24）均较空白对照组（分别为1.01±0.18、1.00±0.05）显著升高（P＆0.05）,同时M1型极化标志物CD86 mRNA及蛋白表达（分别为1.42±0.01、1.55±0.07）均较空白对照组（分别为1.00±0.09、1.00±0.10）显著上调（P＆0.01）,且M1型极化相关细胞因子TNF-α、IL-1β mRNA及蛋白表达量均显著增加（P＆0.05）;加入TREM-1阻断剂LP17后,与LPS组相比,TREM-1 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义（P＆0.05）,CD86 mRNA（0.96±0.00）和蛋白（1.36±0.02）表达水平均显著下降（P＆0.05）,TNF-α、IL-1β mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＆0.05）。对于M2型极化标志物CD206及极化相关细胞因子IL-10,细胞培养24 h后,CD206 mRNA（0.56±0.05）及蛋白表达（0.25±0.04）均较空白对照组（分别为1.02±0.25、1.00±0.10）显著下调（P＆0.01）,IL-10 mRNA较空白对照组表达显著上调（P＆0.05）,其蛋白表达水平与空白对照组相比差异无统计学意义（P＆0.05）;LPS+LP17组CD206、IL-10 mRNA表达均较LPS组显著下调（P＆0.05）,CD206、IL-10蛋白表达在两组间差异无统计学意义（P＆0.05）。结论 TREM-1及其下游信号通路可能参与了Pg-LPS介导的巨噬细胞M1型极化,从而在牙周炎发生发展中发挥促炎作用;尚无证据表明TREM-1是否参与调控Pg-LPS介导的巨噬细胞M2型极化。