融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究

摘要

目的将变形链球菌(Streptococcus mutans)表面蛋白PAc编码A区和P区(A-P)的序列克隆到真核载体pGLU中,构建出GTF-PAc融合防龋DNA疫苗,并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达.方法将pCIA-P质粒中A-P片段序列与pGLU质粒连接,构建出GTF-PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P.将pGLUA-P转化大肠杆菌BL21(DE3),以SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA-P的表达.通过脂质体将pGLUA-P转染大鼠原代肌母细胞,以免疫组织化学检测GLUA-P的表达.结果 GTF-PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P经酶切分析证实携带GLU和A-P片段.pGLUA-P转化的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白.pGLUA-P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达.结论成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA-P,所携带的基因序列正确,能够在原核和真核细胞中表达正确的融合蛋白.