含绿色荧光蛋白报告基因的TIMP-2真核表达载体的构建及其在人成釉细胞瘤中的表达

摘要

目的构建含有绿色荧光蛋白报告基因（GFP）的TIMP-2真核表达载体PcDNA3·1（+）/GFP-TIMP-2,并探讨其在成釉细胞瘤（AB）中的表达情况。方法应用RT-PCR技术从体外培养的人AB中获得TIMP-2目的基因片段,采用分子克隆技术构建该基因的真核表达载体PcDNA3·1（+）/GFP-TIMP-2,并以脂质体为介导转染至体外培养的人AB细胞。流式细胞仪测定转染效率,倒置相差荧光显微镜观察绿色荧光,RT-PCR检测转染前后TIMP-2mRNA的表达量的改变。结果构建的PcDNA3·1（+）/GFP-TIMP-2经酶切和测序鉴定证明和预期结果一致。PcDNA3·1（+）-TIMP-2转染人AM细胞后TIMP-2mRNA的表达量增加。结论成功构建TIMP-2真核表达载体PcDNA3·1（+）/GFP-TIMP-2并转染至人AB细胞。