人工合成小干扰RNA抑制涎腺腺样囊性癌DNA甲基转移酶1的表达

摘要

目的通过筛选针对涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）DNA 甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT-1）基因有效的小于扰 RNA（small interfering RNA,siRNA）序列和分析 RNA 干扰（RNA interference,RNAi）作用的时效、量效关系,为建立 ACC 稳定抑制 DNMT-1的表达载体,深入了解 DNMT 在 ACC 抑癌基因甲基化过程中的作用。方法设计并人工合成4对siRNA,脂质体介导分别转染 ACC 细胞系 ACC-2、ACC-3和 ACC-M 细胞,分别于转染后24、48和72 h,采用 PCR、RT-PCR 和 Western blot 方法检测各细胞系 DNMT-1的 mRNA 和蛋白表达,筛选有效的siRNA 干扰序列,同时设置 siRNA 不同浓度转染组,分析 RNAi 作用的量效关系。以 Cy3标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶 siRNA 作为阳性对照组。结果 2对 siRNA 对3株 ACC 细胞系细胞 DNMT-1的 mRNA表达产生了抑制作用,它们分别使 ACC-2、ACC-3、ACC-M DNMT-1表达抑制67%、86%、92%和76%、76%、86%,抑制作用出现的时间为转染后24～48 h,维持24～48 h,与 siRNA 浓度成正比,Westernblot 检测符合 mRNA 的检测结果。结论得到了2对针对 ACC DNMT-1基因有效的 siRNA 干扰序列。它们能显著抑制涎腺 ACC 细胞系 DNMT-1的 mRNA 和蛋白表达,该抑制作用具有时间依赖性和浓度相关性。