定向敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA的重组质粒构建

摘要

目的构建定向敲除牙龈卟啉单胞菌（PorPhyromonas gingivalis,Pg）菌毛蛋白FimA基因的质粒pPHU281ASpecB,用于后续构建菌毛蛋白FimA缺陷型Pg,为研究FimA的功能奠定分子基础。方法厌氧培养PgATCC33277,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增PgFimA基因一定长度的上游A片段及下游B片段,并在扩增片段两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将A和B基因插入到载体自杀质粒pPHU281中,并添加大观霉素抗性基因片段,重组的pPHU281ASpecB在大肠杆菌DH-5α内扩增后酶切电泳鉴定并进行DNA测序。结果通过对重组质粒pPHU281ASpecB进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明重组质粒pPHU281ASpecB构建成功。结论成功构建了质粒pPHU281ASpecB,有利于菌毛蛋白FimA缺陷型Pg的构建,为深入研究FimA的作用机制奠定了基础。