丝氨酸蛋白酶HtrA1在人牙周膜组织中的表达及对人牙周膜细胞增殖的影响

摘要

目的观察丝氨酸蛋白酶HtrA1在人牙周膜组织中的表达,探讨其在人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLC）增殖中的作用。方法收集武汉大学口腔医学院口腔颌面外科门诊拔除的12至25岁健康前磨牙6颗和第三磨牙3颗,要求牙根完整、无龋坏和牙周组织炎症,反转录PCR和免疫组化染色方法分别检测HtrA1在人牙周膜组织中的mRNA和蛋白的表达,组织块法体外培养原代hPDLC,甲基噻唑基四唑比色法检测细胞增殖。用慢病毒转染的方法获得HtrA1基因过表达和基因沉默稳定细胞株,并以空载体慢病毒为对照,然后分别在培养的第1、3、5、7、9 d,细胞计数CCK-8试剂盒（cell countingkit-8,CCK-8）检测HtrA1对hPDLC增殖的影响。结果反转录PCR结果显示HtrA1mRNA在人牙周膜组织中呈阳性表达,免疫组化染色结果显示HtrA1蛋白在人牙周膜组织中也呈阳性表达,并主要表达于hPDLC胞质和胞外基质中。hPDLC经体外培养后生长曲线符合该细胞生长特征。慢病毒成功将HtrA1基因过表达和基因沉默后,CCK-8检测结果显示体外培养1、3、5、7、9 d后,分别与各自的空载体对照组相比,过表达HtrA1使hPDLC的增殖速率显著减弱（A值分别为0.897±0.060、0.890±0.083、1.631±0.038、1.111±0.041、1.110±0.189）,而基因沉默HtrA1后hPDLC增殖速率显著加快（A值分别为0.329±0.021、0.529±0.044、0.973±0.056、1.626±0.102、2.344±0.198）（P＜0.05）。结论HtrA1在mRNA和蛋白水平均表达于人牙周膜组织中,并对hPDLC的增殖起重要调节作用。