小鼠组氨酰tRNA合成酶与麦芽糖结合蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达与鉴定

摘要

目的在大肠杆菌中表达小鼠组氨酰tRNA合成酶（HARS）与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合基因,通过亲和层析纯化以获得具有抗原特异性的重组蛋白。方法提取C57BL/6小鼠肌肉组织总RNA,反转录为cDNA,利用软件设计一对特异性引物,扩增HARS基因上游591对碱基序列。对扩增产物和载体质粒pMALc-5e分别进行双酶切,再用T4连接酶连接得到重组质粒。将其转化大肠杆菌感受态细胞,挑取单克隆培养并鉴定质粒序列。异丙基-β-D硫化吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达后亲和层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白进行相对分子质量粗鉴定,蛋白印迹法鉴定抗原特异性。结果重组HARS-MBP融合蛋白基因在大肠杆菌胞质中高效表达,亲和层析纯化后的融合蛋白与预测相对分子质量66 000相符,与抗体具有良好的特异结合能力。结论小鼠HARS-MBP融合基因能够在大肠杆菌中稳定高效地表达,表达的蛋白具有良好的抗原特异性,为后续炎性肌病的研究提供了基础。