SS-HPS-APP三联亚单位疫苗对小鼠保护效果的评价

摘要

为评价猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病-猪传染性胸膜肺炎三联亚单位疫苗(下称三联苗)对小鼠的保护效果,本研究将猪链球菌(SS)保护性抗原EF和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)保护性抗原OMP、ApxⅠ、ApxⅡ序列分别克隆至pET-28a和pCold-sumo载体,再转化至E.coli BL21 (DE3)中构建重组菌,经过诱导表达纯化获得重组蛋白rEF、rOMP、rApxⅠ和rApxⅡ.利用本研究室前期构建的pET-28a-sly/BL21、pET-28a-mrp/BL21、pET-28a-oppa/BL21、pET-28a-oppa2/BL21、pET-28a-afua/BL21、pET-22b-cdtb/BL216株重组表达菌株,表达纯化SS的rSLY、rMRP和副猪嗜血杆菌(HPS)的rOPPA、rOPPA2、rAfuA、rCdtB.将上述重组蛋白等量混匀,使每一剂疫苗中各蛋白的含量均为20μg,再与ISA 201佐剂乳化制成三联苗.将血清2型SS(SS2)464株和SS9 GZ2株按照不同比例稀释后感染C57小鼠;将血清5型HPS (HPS5) HN10株、HPS13 ZD12株、血清5型APP (APP5) MD株和APP7 S-8株按照不同比例稀释后感染BALB/c小鼠,统计上述6个菌株对小鼠的最小致死剂量(MLD).将20只C57小鼠和40只BALB/c小鼠均分成2组(每组合10只C57小鼠和20只BALB/c小鼠),间隔14d分别皮下免疫2次300 μL PBS+ISA 201佐剂和三联苗.二免后14 d采集小鼠血清,通过间接ELISA检测各组小鼠的EF、MRP、SLY、OPPA、OPPA2、CdtB、AfuA、OMP、ApxⅠ和ApxⅡ的抗体水平.首免后28 d,将C57小鼠再按照免疫组别平均分为2组,分别以MLD的SS2和SS9攻菌;同理,将BALB/c小鼠再平均分为4纽,分别以MLD的HPS5、HPS13、APP5和APP7攻菌.结果 显示:SS2和SS9对C57小鼠的MLD均为5×107 cfu/只,HPS5、HPS13、APP5和APP7对BALB/c小鼠的MLD分别为1.5×108 cfu/只、5×107 cfu/只、1.5× 108 cfu/只和7.5×108 cfu/只.与免疫前相比,二免后14 d实验组小鼠体内对EF、SLY、MRP、OPPA、OPPA2、CdtB、AfuA、OMP、ApxⅠ和ApxⅡ的抗体水平显著升高(p＜0.0001),对照组小鼠体内对10种抗原的抗体水平均无差异;实验组与对照组二免后抗体水平差异显著(p＜0.0001).攻菌实验中,对照组小鼠在观察期内全部死亡,攻菌SS2、SS9、HPS5、HPS13、APP5和APP7的实验组小鼠存活率分别为100％(5/5)、80％(4/5)、60％ (3/5)、80％(4/5),80％(4/5),100％(5/5),对照组和实验组的存活率有显著差异(p＜0.05).以上结果表明该三联苗对SS2、SS9、HPS5、HPS13、APP5和APP7攻击的小鼠能够提供良好的交叉保护性.本研究首次系统研究并证实了该三联苗的免疫保护结果较好,为其进一步研究及应用提供了实验依据.