猫细小病毒适配体的筛选与鉴定

摘要

为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体.对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dotblot鉴定,确定其中的Apt27和Apt52为候选适配体.MTT试验表明,Apt27和Apt52对CRFK细胞(猫肾细胞)无毒性作用.利用酶联寡核苷酸法(ELONA)测定Apt27和Apt52的解离常数,结果显示分别为 18.3249±7.1723 nmol/L 和24.7882±10.0067nmol/L.同时采用 dot blot、间接免疫荧光试验(IFA)方法检测 Apt27和Apt52对不同病毒的结合情况,结果显示其对猫杯状病毒、猫疱疹病毒的结合力弱,而对FPV的结合能力较强.预测二者二级结构可见,Apt27和Apt52均具有环状、发卡状结构,其中茎环结构可能为适配体特异性识别FPV的基本结构.本研究首次筛选到特异性识别FPV的适配体序列,为FPV的检测与治疗制剂的开发提供了新思路.