蓝狐β-防御素1基因(vBD1)的真核表达及其抑菌活性分析

摘要

为研究蓝狐β-防御素1(vBD1)蛋白的生物学特性,本研究通过PCR扩增获得蓝狐vBD1基因的编码区全长序列,利用生物学软件对蓝狐vBD1基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,并构建了真核表达重组质粒pPIC9K-vBD1,电转化至毕赤酵母菌株GS115,鉴定阳性的重组酵母菌经甲醇诱导表达,对表达目的蛋白进行了抑菌活性研究.生物信息学分析结果显示,蓝狐vBD1蛋白的三级结构与人类β-防御素1(hBD1)序列相似性达63.89％.Tricine-SDS-PAGE和westem blot鉴定结果显示,蓝狐vBD1蛋白在毕赤酵母中能够分泌表达,诱导96 h其表达量最大.CFU计数法结果显示,终浓度为60 μg/mL和120 μg/mL的vBD1重组蛋白对大肠杆菌的抑菌率分别为22.92％和29.17％,对金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为28.40％和30.18％,抑菌活性均在12h达到最佳.本研究为探究蓝狐vBD1蛋白生物学功能及作用机制奠定基础.